Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского, Симферополь, Украина.
Клинические проявления воспалительных процессов, вызываемых грамотрицательной микрофлорой, связаны с наличием у этой группы микроорганизмов особой высокомолекулярной субстанции, локализующейся в клеточной стенке и называемой липополисахаридом (ЛПС) или эндотоксином. ЛПС обладает исключительно высокой биологической активностью и относится к числу наиболее сильных экзогенных модуляторов иммунологической реактивности. Посредством индукции синтеза широкого спектра провоспалительных медиаторов клетками миеломоноцитарного ряда, ЛПС может воздействовать практически на все ткани и системы организма. Вследствие прямой или непрямой ЛПС-зависимой активации эндотелиоциты сосудов резко повышают уровень продукции молекул межклеточной адгезии, колониестимулирующих/ростовых факторов, цитокинов и хемоаттрактантов. [2, 11]. Экспериментальные исследования зарубежных ученых свидетельствуют о том, что эндотоксин хорошо проникает через гематоофтальмический барьер [12].В нейтрализации биологической активности и клиренсе ЛПС существенную роль играют естественные антиэндотоксиновые антитела. Очевидно, что относительное содержание сывороточных антиэндотоксиновых антител разных классов у больных увеитами, во-первых, будет характеризовать протективный потенциал гуморального звена иммунитета по отношению к ЛПС, и, во-вторых, указывать на интенсивность транслокации ЛПС из кишечника [10]. ЛПС-связывающие рецепторы нейтрофилов способны эффективно связывать агрегированные молекулы эндотоксина, поэтому определение относительного количества нейтрофилов несущих ЛПС-связывающие рецепторы, которые находятся в функционально активном состоянии и не заняты лигандом, имеет большое значение для оценки ЛПС-связывающей емкости нейтрофилов [5].В связи с этим целью данной работы являлось изучение содержания антиэндотоксиновых антител (гуморального звена антиэндотоксинового иммунитета), относительного количества нейтрофилов несущих ЛПС-связывающие рецепторы (клеточного звена антиэндотоксинового иммунитета), а также анализ взаимосвязи этих показателей у больных с гипертензионными увеитами. Эти аспекты, которые ранее не освещались в литературе, позволят расширить представления о роли иммунной системы в развитии эндогенных увеитов, а также разработать на этой основе комплексный подход к лечению данной патологии.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Обследовано 23 больных передними гипертензионными увеитами, из них у 10 больных (11 глаз) был иридоциклит герпес-вирусного происхождения, у 6 больных (6 глаз) — передний увеит, сочетанный с серонегативным спондилоартритом, у 7 пациентов (7 глаз) — иридоциклит неясного генеза. Возраст пациентов колебался от 20 до 64 лет. Мужчин было 15 (62 %), женщин — 8 (38 %).
Офтальмологическое обследование больных проводили с помощью визометрии, периметрии, тонометрии, тонографии, биомикроскопии, гониоскопии, офтальмоскопии, биомикроофтальмоскопии. В дополнение к общепринятым лабораторным методам обследования больным проводилось определение методом твердофазного иммуноферментного анализа уровней сывороточных антиэндотоксиновых антител классов А, M и G (соответственно анти-ЛПС-IgА, анти-ЛПС-IgМ и анти-ЛПС-IgG) [4, 6]. Сыворотку крови получали общепринятым способом и хранили при +4°С в присутствии 0,05% азида натрия. В качестве антигена при определении антиэндотоксиновых антител использовали ЛПС Escherichia coli K30 (О9:К30:Н12). Уровни анти-ЛПС-антител выражали в условных единицах оптической плотности конечного продукта ферментативной реакции для разведения тестируемой сыворотки крови 1:50. Концентрацию общих иммуноглобулинов (IgG, IgM и IgA) определяли микротурбидиметрическим методом [6]. Для определения относительного количества нейтрофилов периферической крови, несущих ЛПС — связывающие рецепторы, как флуоресцентный зонд использовали флуоресцентное производное эндотоксина — ЛПС — флуоресцеинизотиоцианат (ЛПС-ФИТЦ). Взаимодействие коньюгата ЛПС-ФИТЦ с нейтрофилами изучали методом проточной лазерной цитофлуориметрии [5]. В качестве контрольных исследовали пробы сывороток крови 50 практически здоровых лиц. Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы «Statistic 5.0 for Windows».
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
У пациентов с передним гипертензионным увеитом клинически наблюдались выраженные проявления воспалительного процесса в сосудистой оболочке: отмечался отек радужки, «стушеванность» ее рисунка, сужение зрачка, выраженная перикорнеальная инъекция глазного яблока, опалесценция влаги передней камеры. Из-за повышения ВГД определялся отек роговицы. Корригированная острота зрения колебалась от 0,08 до 0,7 и в среднем составляла 0,3 ± 0,12. ВГД было от 28 до 39 мм.рт. ст., в среднем — 32,5±3,2 мм рт.ст.
У группах больных иридоциклитами при спондилоартритах и передними увеитами неясной этиологии определено достоверное повышение среднего содержания анти-ЛПС-IgА, по сравнению, с контрольной группой в 1,7 раза (р < 0,05). У пациентов с иридоциклитами герпес-вирусного происхождения также имелась тенденция к повышению уровня анти-ЛПС-IgА, однако отличия от контрольной группы были статистически недостоверными. Повышенный уровень анти-ЛПС-IgA у данной категории больных может указывать на увеличение антигенной нагрузки вследствие избыточной транслокации эндотоксина в системный кровоток [10].
У пациентов с передним увеитом всех групп отмечалось снижение содержания анти-ЛПС-IgM, в сравнении, с показателями контрольной группы. Так, уровень анти-ЛПС-IgM у пациентов с передними увеитами вирусной этиологии, иридоциклитами при спондилоартритах и передними увеитами невыясненной этиологии был, соответственно, в 2; 2,2 и 1,9 раза меньше (р < 0,05), чем в контрольной группе. Учитывая, что наиболее выраженным протективным эффектом по отношению к эндотоксину, который преодолел иммунный бартер кишечника и попал в системный кровоток, обладают именно антиэндотоксиновые антитела класса М [15], пониженное содержание анти-ЛПС-IgM можно рассматривать как неблагоприятный фактор для развития передних увеитов. Содержание анти-ЛПС-IgG у больных передним увеитом всех групп в среднем достоверно не отличалось от показателей контрольной группы. Однако у большинства больных (87%) уровень анти-ЛПС-IgG отличался в большую или меньшую сторону от среднего показателя контрольной группы более чем на 30 %.
Для сравнительной оценки состояния гуморального звена иммунитета у больных увеитами были определены общие IgA, IgМ и IgG в сыворотке крови исследуемых пациентов (табл. 2). Ряд исследователей считает, что у больных с эндогенными уветами определяется рост общих IgA и IgМ [1], такая же тенденция отмечена в группах больных и в нашем исследовании. Во всех группах больных обнаружена отрицательная связь (корреляция r = — 0,7) между общим IgМ и анти-ЛПС-IgМ, что указывает на наличие селективного иммунодефицита по антиэндотоксиновым антителам класса М у больных гипертензионными иридоциклитами.
У больных передними увеитами вирусной этиологии, иридоциклитами при спондилоартритах и передними увеитами невыясненной этиологии наблюдалось снижение относительного количества клеток, несущих ЛПС-связывающие рецепторы (табл. 2) соответственно на 11,8 %, 11,05 % (р<0,05) и на 3,85 % (р>0,05) меньше, в сравнении со средними показателями в контрольной группе, что свидетельствует о снижении потенциала нейтрофилов у этих больных связывать ЛПС. Если учитывать, что у пациентов этих групп отмечалось снижение антиэндотоксиновых антител класса M, то можно утверждать, что у больных с гипертензионными иридоциклитами имеются нарушения в системе детоксикации и клиренса эндотоксина, что в свою очередь может усугублять течение переднего эндогенного увеита или даже являться инициирующим фактором его развития.
Полученные данные подтверждают теорию некоторых исследователей [2, 3], о возможном участии эндотоксиновой агрессии в инициации воспалительного процесса (в том числе и вирусного происхождения) в сосудистой оболочке глаза.
Выводы
1. У больных передними эндогенными гипертензионными увеитами обнаружены выраженные нарушения гуморального и клеточного антиэндотоксинового иммунного статуса.
2. Наиболее высокий уровень анти-ЛПС-IgA выявлен у пациентов с гипертензионными иридоциклитами сочетанными со спондилоартритами и неясной этиологии. У пациентов всех групп определено снижение содержания анти-ЛПС-IgМ. Во всех группах больных обнаружена отрицательная связь (корреляция r = — 0,7) между общим IgМ и анти-ЛПС-IgМ.
3. Во всех группах больных наблюдалось снижение относительного количества клеток, несущих ЛПС-связывающие рецепторы.
4. Полученные данные указывают на возможное участие эндотоксина в патогенезе эндогенных увеитов и необходимость разработки методов коррекции избыточной транслокации эндотоксина в системный кровоток и дисбаланса антиэндотоксинового иммунитета в комплексном лечения воспалительных заболеваний глаз.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бездетко П.А., Бачук Н.Ю. Состояние Т- и В- иммунитета при рецидивирующих эндогенных увеитах // Офтальмологический журнал. — 2001. — №3. — С. 29-32.
2. Вышегуров Я. Х., Аниховская И. А., Батманов Ю. Е., Яковлев М. Ю. Кишечный эндотоксин в патогенезе воспалительной патологии глаз и антиэндотоксиновая составляющая ее лечения // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 2007. — №1. — С.12-14.
3. Вышегуров Я.Х., Аниховская И.А., Расческов А.Ю., Усов И.А., Яковлев М.Ю. эндотоксиновая агрессия как облигатный фактор патогенеза иридоциклитов различного происхождения и ее этиология // Физиология человека. — 2006. — Т.32, — № 6. — С. 109-113.
4. Гордиенко А.И., Бакова А.А., Химич Н.В., Белоглазов В.А. Уровни естественных антител к липополисахаридам энтеробактерий у постоянных доноров республики Крым // Iмунологiя та алергологiя. — 2003. — № 4. — С. 31-36.
5. Гордиенко Ан.И., Исакова Л.М., Гордиенко Ал.И. Белоглазов В.А. Использование липополисахарида, меченного флуоресцеинизотиоцианатом, в качестве флуоресцентного зонда для выявления липополисахарид-связывающих рецепторов на клетках крови // Український журнал гематології та трансфузіології. — 2003. — Т. 3, № 3. С. 16-21.
6. Гордиенко А.А., Притуло О.А., Белоглазов В.А., Бакова А.А., Химич Н.В. Взаимосвязь между уровнями антител к липополисахариду и аутоантител к ДНК у больных вульгарной пузырчаткой // Iмунологiя та алергологiя. — 2002. — № 4. — С. 67-72.
7. Клиническая офтальмология / Е.Е. Сомов — М.: МЕДпресс-информ, 2005. — 392 с.
8. Коновалова Н. В., Наріцина Н. І., Серебріна Т. М. и др. Спосіб комбінованого застосування флоксалу та індоколіру у лікуванні запальних захворювань переднього та заднього відділів ока // Офтальмологический журнал. — 2007. — № 2. — С. 43-45.
9. Увеиты / Н.С. Зайцева, Л.А. Канцельсон — М.: Медицина, 1984. — 318 с.
10. Barclay G.R. Endogenous endotoxin-core antibody (EndoCAb) as a marker of endotoxin exposure and a prognostic indicator: a review // Prog. Clin. Biol. Res. — 1995. — 392. — P. 263-272.
11. Heine H., Rietschel E.T., Ulmer A.J. The biology of endotoxin // Mol. Biotechnol. — 2001. — № 3. — P. 279-296.
12. Kozhich A.T., Chan C.C., Gery I., Whitcup M. Recurrent intraocular inflammation in endotoxin-induced uveitis // Invest. Ophthal. Vis. Sci. — 2000. — V. 41 № 7. — P. 1823.
13. Peter J McCluskey, Hamish M. A. Towler, Susan Lightman Management of chronic uveitis // British Medical Journal. — 2000. — Vol. 320 — P. 555-558.
14. Smith J. R. HLA-B27-associated uveitis // Ophthalmol. Clin. North. Am. — 2002. — Sep;15(3) — P. 297-307.
15. Trautmann M., Held T.K., Susa M., Karajan M.A. et al. Bacterial lipopolysaccharide (LPS)-specific antibodies in commercial human immunoglobulin preparations: superior antibody content of an IgM-enriched product // Clin. Exp. Immunol. — 1998. — 111, №1. — P. 81-90.
